組織腎素（renin）定量檢測試劑盒操作程序

組織腎素（renin）定量檢測試劑盒操作程序：

1.已稀釋好的ABC和TMB顯色液在加入酶標板孔前都應預先在37℃中平衡至少30分鐘。試劑或樣品稀釋時，切不可忘記混勻。每次檢測都應該做標準曲線。用戶須估計樣品待測因子的含量，決定適當?shù)南♂尡稊?shù)。

確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目，并增加1孔作為TMB空白顯色孔。總數(shù)=樣品數(shù)+9；做雙份檢測時×2。其余重包裝好放入冰箱中。

2.將2000pg/ml,1000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml的標準品各100μL依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對于人血清、血漿、尿液、細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品100μL。

3.酶標板加上封板膜，37℃反應90分鐘。

4.反應后用自動洗板機吸去酶標板內的液體；或甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下。不洗。

5.將準備好的生物素抗人renin抗體工作液按每孔100μL依次加入（TMB空白顯色孔除外）。

6.酶標板加上封板膜，37℃反應60分鐘。

7.1X洗滌緩沖液洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右（每孔洗液至少300μL）。

8.將準備好的ABC工作液按每孔100μL依次加入（TMB空白顯色孔除外）。

9.酶標板加上封板膜，37℃反應30分鐘。

10.1X洗滌緩沖液洗滌5次，每次浸泡1～2分鐘左右（每孔洗液至少300μL）。

11.按每孔90μL依次加入已在37℃平衡30分鐘的TMB顯色液，37℃避光反應25～30分鐘。

12.注意：顯色時間供參考，因用戶實驗室條件差異，最佳顯色時間會有所不同。此時肉眼可見標準品的前3～4孔有明顯的梯度藍色，后3～4孔差別不明顯。

13.按每孔100μL依次加入終止液，此時藍色立轉黃色。

14.用酶標儀在450nm測定O.D.值。

15.有兩種設定空白對照的方案：

① 將TMB空白顯色孔(只加TMB顯色液和終止液)設為對照。所有的標準品和樣品的吸光值減去TMB空白顯色孔的吸光值后，在坐標紙上畫出曲線，以吸光值作為縱坐標，以濃度作為橫坐標。

② 將零孔設為對照。所有的標準品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后，得到的數(shù)據(jù)可以直接在坐標紙上畫出曲線。

根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應該×N。

谷氨酰胺測試盒Glutamine test kit

谷氨酸測試盒Glutamate test kit

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